怎么保證熒光原位雜交技術(shù)fish檢測的溫度？
熒光原位雜交技術(shù)fish檢測中重要的因素是溫度、光照、濕度和各種試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標(biāo)DNA的雜交效率；光照影響了熒光染料的強(qiáng)度；各種試劑pH是否符合要求直接關(guān)系到FISH的穩(wěn)定性。
如何保證熒光原位雜交技術(shù)fish檢測操作中的溫度呢？
對于該問題*的措施是使用一些FISH的儀器進(jìn)行操作。如果是手工操作，首先要對FISH操作過程中可能使用的一些儀器進(jìn)行溫控能力的檢查，諸如水浴鍋、孵箱，對其中不符合要求的要進(jìn)行更換（疾病診斷中的探針要求溫控精度在1度以內(nèi)）。其次，要盡可能地保持操作環(huán)境溫度在20度以上，對于在冬季進(jìn)行的FISH操作尤為重要。此外對于需要預(yù)熱以達(dá)到要求溫度的試劑，在使用前必須使用溫度計(jì)對其進(jìn)行測溫。同時(shí)檢測的樣本不能超過4塊。操作中的行動(dòng)一定要迅速。操作者還往往忽視一些小部件的溫度，諸如載玻片和蓋玻片。特別是在冬季，蓋玻片本身溫度就低，加之探針的量本就不多（10ul），因此事先沒有預(yù)熱的蓋玻片會使得雜交液的溫度急劇下降嚴(yán)重地影響了探針和目標(biāo)DNA的雜交效率。因此對上述小部件的預(yù)熱也能有效地提高FISH的雜交效果。使用熒光顯微鏡觀察結(jié)果時(shí)，初有清晰而明亮的信號。但隨后信號急劇衰減。幾分鐘后信號就消失了。正常情況下，商業(yè)化探針即使是雜交后，如果保存適當(dāng)，熒光信號能保持半年以上。出現(xiàn)上述情況主要的原因是操作觀察的過程中或是探針的保存過程中沒有采取嚴(yán)格的避光措施。陽光或是強(qiáng)的燈光都會使熒光染料發(fā)生急劇的淬滅，從而造成了觀察結(jié)果的不穩(wěn)定。因此在操作和觀察時(shí)，盡可能在暗室中操作。也可以在封片觀察時(shí)加入一定的antifade（抗淬滅劑）以延緩熒光素的淬滅。
